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Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e Testes de DSTs

A reação em cadeia da polimerase (PCR) é uma técnica de laboratório. O objetivo do teste de PCR é encontrar pequenas quantidades de DNA em uma amostra, usando um processo conhecido como amplificação.

Durante a amplificação por PCR, o DNA de interesse é copiado repetidamente até que haja o suficiente para análise e detecção. Por exemplo, a PCR pode ser usada para identificar pequenas quantidades de DNA dos organismos que causam gonorréia ou clamídia que estão presentes em uma amostra de urina.

Reação em cadeia da polimerase (PCR) Como o PCR funciona?

O primeiro passo do PCR é criar primers. Estas são sequências curtas de DNA que correspondem às extremidades da amostra de DNA que você está tentando detectar.

Eles são o truque para encontrar, amplificar e detectar um pedaço específico de DNA. Esse pedaço de DNA pode ser usado para identificar um patógeno. Também pode ser usado para fazer coisas como detectar genes para resistência a antibióticos.

Uma vez que você tenha seus primers, o próximo passo na PCR é aquecer a amostra de forma que o DNA de fita dupla se separe em duas cadeias simples – isso é chamado de desnaturação. Então os primers são combinados com o DNA da amostra.

Depois disso, uma DNA polimerase é usada para iniciar a replicação do DNA na localização do primer. Finalmente, o DNA é aquecido para separar os filamentos mais uma vez. Com isso, todo o processo de PCR começa novamente.

A quantidade do segmento de DNA de interesse presente na amostra aumenta exponencialmente com cada ciclo de PCR. No primeiro ciclo, uma cópia se torna dois. Então duas cópias tornam-se quatro, então tornam-se oito, etc.

Esse crescimento exponencial significa que, geralmente, apenas 20 a 40 ciclos são necessários para determinar se o DNA em questão está presente. (Se o DNA estiver presente, 20-40 ciclos também são suficientes para fornecer uma amostra suficiente para análise).

Todos os passos de uma reação em cadeia da polimerase – desnaturalizando o DNA, aplicando os primers e alongando o DNA – acontecem em diferentes temperaturas. Isso significa que depois que a mistura inicial é montada, as etapas podem ser controladas através de um processo conhecido como termociclagem.

Termociclagem significa que a temperatura é mantida nos níveis necessários por apenas o tempo suficiente para que cada etapa ocorra.

Assim, a PCR é uma maneira eficiente de amplificar a quantidade de DNA alvo. Na verdade, isso pode ser feito em um único tubo de teste com pouca necessidade de intervenção humana.

A reação em cadeia da polimerase representou uma revolução na técnica biológica quando foi desenvolvida pela primeira vez no início dos anos 80. O criador da PCR, Kary Mullis, ganhou o Prêmio Nobel de Química por seu trabalho em 1993.

Por que o PCR é relevante para o teste de DST

Reação em cadeia da polimerase, e técnicas relacionadas, como reação em cadeia da ligase , estão provando ser de importância crescente para o teste de DST.

Isso ocorre porque essas técnicas podem identificar diretamente pequenas quantidades de DNA ou RNA viral em amostras. Identificar o código genético de um patógeno não requer que o patógeno esteja vivo – ao contrário da cultura bacteriana ou da cultura viral.

Também não exige que a infecção tenha ocorrido há muito tempo para que as pessoas tenham desenvolvido uma reação de anticorpos detectável (a forma como as infecções são detectadas pelo ELISA Isso significa que, às vezes, as técnicas de PCR podem detectar doenças mais cedo do que outros testes.

Melhor ainda, as DSTs podem ser detectadas sem a necessidade de se preocupar em manter as amostras vivas ou testá-las exatamente no momento certo.

 

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